凝膠色譜柱作為高分子分離、分子量測定的核心部件，新手操作時若忽視細節，易導致柱效下降、數據偏差甚至柱體損壞。以下梳理5個高頻誤區及實用規避方案，助力新手規范操作。?
誤區一：樣品前處理省略過濾/離心?
新手常直接進樣未處理的樣品，若樣品含顆粒雜質或未全部溶解的固體，會堵塞色譜柱篩板與孔隙，導致柱壓驟升、峰形拖尾。?
規避建議：液體樣品需經0.22μm濾膜過濾(根據樣品性質選有機相或水相濾膜)，黏稠或含懸浮顆粒的樣品先離心(8000r/min，5分鐘)，取上清液再過濾，確保樣品無固體雜質。?
誤區二：流速驟升驟降?
為追求實驗速度，新手可能突然調高流速(如從0.5mL/min直接升至1.5mL/min)，或實驗結束后瞬間降為0，這會沖擊柱內固定相，導致柱床塌陷、分離效率下降。?
規避建議：流速調整需循序漸進，每次變動幅度不超過0.2mL/min，等待柱壓穩定后再繼續調整；實驗結束后，先將流速降至0.1-0.2mL/min，維持5分鐘，再關閉泵體。?
誤區三：平衡時間不足急于進樣?
新手常看到基線“看似平穩”就急于進樣，實則流動相與柱內殘留溶劑未充分平衡，易出現基線漂移、峰面積重復性差的問題。?
規避建議：更換流動相后，需根據柱長平衡(150mm柱平衡30分鐘，300mm柱平衡60分鐘以上)，觀察基線波動范圍(應≤0.1mV/h)，同時進樣空白溶劑驗證，確認無干擾峰后再正式進樣。?
誤區四：實驗后未及時清洗柱體?
新手可能實驗結束后直接關機，未清洗柱內殘留樣品(尤其是含強吸附性組分的樣品)，長期積累會導致固定相污染、柱效不可逆下降。?
規避建議：實驗后用兼容流動相沖洗(如分析蛋白質樣品后，用5%甲醇水溶液沖洗30分鐘；分析有機溶劑樣品后，用純甲醇沖洗20分鐘)，較后用保存溶劑(如80%甲醇水)沖洗10分鐘，確保柱內無殘留。?
誤區五：關機后未妥善保存柱子?
新手關機后常忽略柱子保存細節，如未密封柱端、暴露在空氣中，導致柱內溶劑揮發、微生物滋生(水相體系)。?
規避建議：卸下柱子后，立即用堵頭密封兩端(避免用手觸碰柱口)，存放于室溫干燥處(避免陽光直射)；若長期不用，每月需用保存溶劑沖洗一次，防止柱內發霉或固定相干裂。?
掌握以上規避方法，能有效延長凝膠色譜柱壽命，保障實驗數據精準性，新手操作時需耐心細致，養成規范操作習慣。
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